Тест для выявления Escherichia coli O157:H7 в кале пр. "РЭД" Российская Экспресс Диагностика

Краткая информация

Escherichia coli O157:H7 является одной из самых распространенных причин бактериальной диареи. Передается, главным образом, через продукты питания, не прошедшие достаточную тепловую обработку (мясо, молочные продукты, сырые фрукты и овощи, загрязненная вода), а также при контакте с зараженными людьми.

Основные симптомы заражения Escherichia coli O157:H7 – геморрагическая диарея, приступообразные острые рези в животе. Оптимальный период для проведения диагностики – первые 7 дней после появления симптомов, т.к. в это время наблюдается наибольшая концентрация бактерий в кале.

Принцип метода

Определение основано на принципе иммунохроматографического анализа. Анализируемый образец жидкого биологического материала абсорбируется поглощающим участком тест-полоски. При наличии в образце клеток Escherichia coli O157:H7 они вступают в реакцию с нанесенными на стартовую зону специфическими моноклональными антителами против Escherichia coli O157:H7, меченными окрашенными частицами, и продолжают движение с током жидкости. В аналитической зоне тест-полоски происходит взаимодействие со специфическими моноклональными антителами, иммобилизованными на поверхности мембраны, с образованием окрашенного иммунного комплекса.

В контрольной зоне тест-полоски специфический окрашенный иммунный комплекс образуется независимо от наличия в тестируемом биологическом материале клеток Escherichia coli O157:H7.

В том случае, если в анализируемом образце присутствуют клетки Escherichia coli O157:H7, на тест-полоске образуются две параллельные линии (красная аналитическая, обозначенная буквой Т, и зеленая контрольная, обозначенная буквой С), что указывает на положительный результат анализа. В случае отсутствия в анализируемом образце клеток Escherichia coli O157:H7 на тест-полоске образуется одна зеленая контрольная линия (С), что указывает на отрицательный результат анализа.

Состав

Один комплект тестов «РЭД Escherichia coli» включает:

• тест-полоски иммунохроматографические «РЭД Escherichia coli» в кассетах из пластика белого цвета – 5, 10 или 20 шт.;
• пробирки с крышкой-капельницей и стержнем для забора образца кала, содержащие буфер для растворения образца – 5, 10 или 20 шт., соответственно;
• этикетки на клеевой основе для маркировки пробирок пользователем – 5, 10 или 20 шт., соответственно;
• инструкцию по применению теста «РЭД Escherichia coli» – 1 шт.

Кассеты с тест-полосками упакованы в индивидуальные вакуумные упаковки из фольги алюминиевой, содержащие пакетики с силикагелем.

Комплект тестов «РЭД Escherichia coli» упакован в картонную коробку.

Необходимые оборудование и материалы, не входящие в состав набора

• контейнеры для сбора образцов кала;
• одноразовые резиновые или пластиковые перчатки;
• часы или таймер.

Аналитические характеристики

• Чувствительность теста «РЭД Escherichia coli» составляет 100%.
• Специфичность теста «РЭД Escherichia coli» составляет >85%.
• Время проведения анализа – 10 мин.

Тест «РЭД Escherichia coli» не дает ложноположительных результатов со штаммами других видов Enterobacteriaceae.

Каждый тест «РЭД Escherichia coli» предназначен для одного определения наличия клеток Escherichia coli O157:H7 в кале человека.

Меры предосторожности

Тест «РЭД Escherichia coli» предназначен только для in vitro диагностики.

Все компоненты теста «РЭД Escherichia coli» в используемых концентрациях являются нетоксичными.

Не следует использовать тесты «РЭД Escherichia coli» после истечения срока годности.

При проведении определения следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т.к. исследуемые образцы биологического материала следует рассматривать как потенциально инфицированные.

Использованные тесты и остатки биологического материала должны быть помещены в специальный контейнер для санитарных отходов.

Анализируемые образцы

Свежесобранный биологический материал (кал), не содержащий консерванты.

Образцы кала должны быть собраны в чистый контейнер. Следует отбирать образцы кала для анализа в течение первой недели после появления симптомов, т.к. в это время наблюдается наибольшая концентрация бактерий Escherichia coli O157:H7 в кале.

Образцы кала до определения можно хранить при температуре 2–4°С не более 2 сут., при необходимости более длительного (до 1 года) хранения – при температуре –20°С и ниже.

Перед анализом образцы кала должны быть полностью разморожены и доведены до комнатной температуры. Повторное замораживание и оттаивание образцов недопустимо.

Подготовка образцов

1. Снять крышку-капельницу с пробирки и с помощью стержня на крышке взять небольшое количество анализируемого образца. Для этого ввести стержень в 3 разные зоны образца, собрав примерно 100 мг кала (рис. 1-1). Если образец жидкий, отобрать 100 мкл с помощью пипетки. Ввести стержень с образцом в пробирку с буфером для растворения образца и плотно завинтить крышку-капельницу (рис. 1-2).

2. Несколько раз встряхнуть пробирку, чтобы облегчить растворение образца (рис. 2-1).

Проведение анализа

Анализируемые образцы кала и тесты «РЭД Escherichia coli» перед проведением анализа должны быть доведены до комнатной температуры (15–25°С).

3. Встряхнуть пробирку с раствором образца (рис. 2-1). Отрезать или отломить кончик крышки-капельницы.

4. Непосредственно перед началом анализа вскрыть упаковку теста «РЭД Escherichia coli», разрывая ее вдоль прорези. Извлечь кассету с тест-полоской и положить ее на ровную горизонтальную поверхность.

5. 4 капли (примерно 100 мкл) жидкого образца внести в круглое окошко кассеты, обозначенное буквой S, избегая попадания твердых частиц образца вместе с жидкостью (рис. 2-2). Для каждого образца или контроля необходимо использовать отдельную пробирку с буфером для растворения образца и отдельный тест «РЭД Escherichia coli».

6. Через 10 мин визуально оценить результат реакции.

Интерпретация результатов

Выявление в тестовом окошке кассеты одной зеленой контрольной линии (С) свидетельствует об отрицательном результате анализа, т.е. указывает на отсутствие в анализируемом образце кала клеток Escherichia coli O157:H7 (рис. 3-1).

Выявление в тестовом окошке кассеты двух параллельных линий (С и Т) свидетельствует о положительном результате анализа, т.е. указывает на наличие в анализируемом образце кала клеток Escherichia coli O157:H7 (рис. 3-2). Интенсивность красной аналитической линии (Т) в тестовом окошке кассеты может меняться в зависимости от концентрации клеток Escherichia coli O157:H7 в образце.

В тех случаях, когда в тестовом окошке кассеты не образуется ни одной окрашенной линии или образуется только красная аналитическая линия (Т), результат анализа признается недействительным (рис. 3-3). При этом анализ следует повторить с использованием другого теста «РЭД Escherichia coli».

Избыточное количество образца кала может привести к появлению в тестовом окошке кассеты нечетких линий темного цвета, которые не имеют диагностического значения. В этом случае следует добавить в образец кала бoльшее количество растворителя и повторить анализ с использование другого теста «РЭД Escherichia coli».

Результаты, полученные с использованием теста «РЭД Escherichia coli», являются предварительными. Для их подтверждения необходимо проведение дополнительных исследований образцов кала с использованием альтернативных методов.

Условия хранения и эксплуатации

Тесты «РЭД Escherichia coli» должны храниться при температуре от 2 до 25°С в упаковке предприятия-изготовителя в сухом месте в течение всего срока годности. Замораживание тестов «РЭД Escherichia coli» не допускается.

Срок годности тестов «РЭД Escherichia coli» – 24 мес. с даты изготовления.

После вскрытия упаковки тесты «РЭД Escherichia coli» должны быть использованы в течение 2 ч при хранении в сухом месте при комнатной температуре.

Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение Инструкции по применению теста «РЭД Escherichia coli».